PCR CONVENCIONAL

Técnica que permite la detección y análisis exactos de la ampliación de ADN, nombrado como el método fundamental para investigaciones biomoleculares. Se producen millones de copias de un fragmento genético específico por causa de la acción de un ADN polimerasa termoestable conocido como Taq polimerasa que es sometida a altas temperaturas conservando la función de enzimas. Por lo tanto, los fragmentos de ADN se amplifican por ciclos repetitivos de desnaturalización, hibridación y extensión. Los tres ciclos que ocurren en este método son: Desnaturalización donde las dos hebras de ADN son separadas, aquí se emplea una temperatura de 90-95°C; luego ocurre el Alineamiento o anneling el ADN tiene que enfriarse a una temperatura de 50 a 77°C para que los primers puedan unirse a la secuencia complementaria. El siguiente ciclo es la extensión que se realiza a 72°C en donde la polimerasa sintetiza hebras complementarias nuevas. Al realizar múltiples ciclos se genera una cantidad extensa de fragmento de ADN, se emplea para ser visualizado en electroforesis y analizar la presencia del microrganismo. Los materiales que se usan son extracto de ADN de la muestra, master mix, primeros específicos para la detección del hongo, Termociclador, cámara de electroforesis con gel de agarosa, colorante para ADN como SYBR Safe, Luz LED (23).